Голландиялык изилдөөчүлөр CRISPR менен биолюминесценцияны айкалыштыруу үчүн эксперименталдык сыноодожугуштуу оорулар

Нидерландиялык окумуштуулардын айтымында, жаңы иштелип чыккан түнкү протеин вирустук оорулардын диагностикасын тездетип, жөнөкөйлөтөт.
Шаршемби күнү ACS Publications журналында жарыяланган алардын изилдөөсү жаркыраган ачык көк же жашыл протеиндердин жардамы менен вирустук нуклеиндик кислоталарды жана алардын сырткы көрүнүшүн тез талдоо үчүн сезгич, бир кадамдуу ыкманы сүрөттөйт.
Нуклеин кислотасынын манжа издерин аныктоо аркылуу патогендерди идентификациялоо клиникалык диагностикада, биомедициналык изилдөөдө жана тамак-аш жана экологиялык коопсуздукту көзөмөлдөөдө негизги стратегия болуп саналат.Кеңири колдонулган сандык полимераздык чынжыр реакциясы (ПТР) тесттери өтө сезгич, бирок татаал үлгүлөрдү даярдоону же натыйжаларды чечмелөөнү талап кылат, бул аларды саламаттыкты сактоонун кээ бир жөндөөлөрү же ресурстары чектелген орнотуулар үчүн практикалык эмес кылат.
Нидерландыдан келген бул топ ар кандай шарттарда колдонула турган тез, көчмө жана колдонууга оңой нуклеин кислотасын диагностикалоо ыкмасын иштеп чыгуу үчүн университеттердин жана ооруканалардын окумуштууларынын ортосундагы кызматташтыктын натыйжасы.
Алар биолюминесценция деп аталган кубулуш менен кубатталган оттун жаркыраган чагылышынан, оттун жаркылдаганынан жана суу фитопланктонунун кичинекей жылдыздарынан шыктанган.Бул караңгыда жаркыраган эффект люцифераза протеининин катышуусу менен болгон химиялык реакциядан келип чыгат.Окумуштуулар люцифераза протеиндерин бутаны тапканда байкоону жеңилдетүү үчүн жарык чыгарган сенсорлорго киргизишти.Бул бул сенсорлорду жардам көрсөтүү пунктун аныктоо үчүн идеалдуу кылганы менен, учурда алар клиникалык диагностикалык тесттер үчүн зарыл болгон жогорку сезгичтикке ээ эмес.CRISPR генди түзөтүү ыкмасы бул мүмкүнчүлүктү камсыз кыла алат, ал эми татаал, ызы-чуу үлгүлөрүндө болушу мүмкүн алсыз сигналды аныктоо үчүн көптөгөн кадамдарды жана кошумча атайын жабдууларды талап кылат.
Окумуштуулар CRISPR менен байланышкан протеинди жөнөкөй санарип камера менен аныктоого боло турган биолюминесценттик сигнал менен айкалыштыруу жолун табышты.Анализ үчүн жетиштүү РНК же ДНК үлгүсү бар экенине ынануу үчүн, изилдөөчүлөр рекомбиназа полимеразды күчөтүү (RPA), 100 ° F туруктуу температурада иштеген жөнөкөй ыкманы аткарышты.Алар Luminescent Nuclein Acid Sensor (LUNAS) деп аталган жаңы платформаны иштеп чыгышты, анда эки CRISPR/Cas9 белоктору вирустук геномдун ар кандай чектеш бөлүктөрү үчүн спецификалык, алардын ар бири жогоруда аларга тиркелген уникалдуу люцифераза фрагменти бар.
Иликтөөчүлөр изилдеп жаткан спецификалык вирустук геном бар болгондо, эки CRISPR/Cas9 белогу максаттуу нуклеиндик кислотанын ырааттуулугуна байланышат;алар жакын жерде болуп, бүтүн люцифераза протеининин пайда болушуна жана химиялык субстраттын катышуусунда көк жарык чыгарууга мүмкүндүк берет..Бул процессте сарпталган субстратты эсепке алуу үчүн изилдөөчүлөр жашыл жарыкты чыгарган башкаруу реакциясын колдонушкан.Түстү жашылдан көккө өзгөрткөн түтүк оң натыйжадан кабар берет.
Изилдөөчүлөр RPA-LUNAS анализин иштеп чыгуу менен платформасын сынап көрүштүSARS-CoV-2 РНКсытажатма РНК изоляциясы жок жана анын диагностикалык натыйжалуулугун мурун жуткундагы тампондун үлгүлөрүндө көрсөттү.COVID-19бейтаптар.RPA-LUNAS SARS-CoV-2ни 20 мүнөттүн ичинде РНК вирустук жүгү 200 көчүрмө/мклге чейин аз болгон үлгүлөрдөн ийгиликтүү аныктады.
Окумуштуулар алардын анализи башка көптөгөн вирустарды оңой жана натыйжалуу аныктай алат деп ишенишет."RPA-LUNAS инфекциялык ооруларды текшерүү үчүн жагымдуу" деп жазышты алар.